基于转录组学和蛋白质组学的高海拔肺动脉高压大鼠模型的新小分子

肾部高拉出（PH）是指静息时少于肾部拉出≥25 mmHg。 它根据血悬浮力研读特征、发病程序和病理学研读分为五类。 第三类寒带肾部高拉出（HAPH）是由于在寒带间歇性环境里面肾换气量代偿性增加和肾小动脉心悸引起的，避免高原心肌病。 针灸病因包括运动性呼吸困难、呕吐和失眠。 HAPH 可能反映了未能适应寒带，并伴有不明了的病理学生理程序。 至少有 1.4 亿人生活在海拔 2,500 米以上的南部，每年有少于 4,000 万人访问这些寒带南部。 间歇性避免脑部基因表述谱发生间有异变所谓； 这是从长期居住在寒带南部的居民及其的族的基因型适应性变所谓里面得知的。HAPH 的放射治疗仍在研究课题里面。应建议患者移至低海拔南部，氧疗正确性。药物放射治疗的研究课题仅限于一些随机试验。 HAPH 的病理学与其他类型的 PH 间有似，因此值得考虑对 PAH 正确性的药物有否对 HAPH 正确性。

然而，所有这些小底物药物都在HAPH里面的正确性性和程序尚不明了。为了解决这个问题，我们意在研究课题间歇性所就其的底物程序，常用啮齿类动物 HAPH 模型，并运用综合多两组研读方法。 在此操作过程里面，我们意在研究课题几种小底物药物和复氧的发挥作用，以确定寒带引起的间歇性的潜在新放射治疗靶点。 特别是，我们研究课题了小底物药物如何影响脑部两者之间的间有异基因和蛋白质表述。

研究课题设计：

将啮齿类动物放置 10% O2（间歇性）三楼里面 3 周以产生 PH。解读啮齿类动物（C 两组）在整个实验里面都处于常氧环境下，并在放射治疗后曾（即从第 21 天开始）用多种形式进行时放射治疗。 3就有，其余啮齿类动物随机分为六两组；各别被处死（第 21 天）以评量心肾功能性。其余 5 两组用小底物药物或复氧放射治疗，从第 21 天到第 35 天处死。慢性间歇性，多种形式处理（M）；慢性间歇性，司来帕格放射治疗；慢性间歇性，马西替坦放射治疗；慢性间歇性，riociguat 放射治疗；慢性间歇性、复氧 (RE)。

酪氨酸两组数据分析：

提取总 RNA，并通过常用 Arraystar rRNA Removal Kit 去除 rRNA 来掺入 mRNA 和非编码 RNA。 mRNA 和非编码 RNA 被完整版所谓缓冲液两组合成短完整版（~200-500 nt）。以短完整版为模板，能用随机六聚体双链合成第一链cDNA。在第二链合成操作过程里面，dTTP 被 dUTP 取代。 然后加入除掉缓冲液以通过末端修复和添加腺嘌呤来所谓学合成和分离短完整版。 短完整版被所谓学合成并与接头连接起来； 常用尿嘧啶-N-糖基所谓复合物消所谓第二条链。 琼脂糖凝胶电泳后，选择合理的完整版作为模板进行时PCR扩增。 常用 Agilent 2100 生物扫描仪和 ABI StepOnePlus 实时 PCR 系统对仪器库进行时表征和运动速度评量。 该文库常用 Illumina HiSeq 2000 系统进行时测序。

LC-MS/MS 数据分析

在连接起来到 Easy-nLC 1000 液间有电泳系统的Q Exactive HF 检测器上数据分析仪器。将干燥的多肽仪器重新溶解在两组分 A（0.1% 硫酸水溶液）里面并载入到捕集柱里面常用两组分 A 的较大拉出力为 280 bar，然后在携带型的 150 μm × 30 cm 硅胶微柱上以 5–35% 的通量进行时分离悬浮间有 B（乙腈和 0.1% 硫酸），水流为 600 nl/min，持续 150 分钟。 QE HF 的 MS 数据分析是在 3e6 碱金属的自动增益控制目标下进行时一次全扫描，然后进行时多达 30 次与数据间有关的 MS/MS 扫描具有很低能量的碰撞解离，在 Orbitrap 里面检测到（R = 15,000 在 200 m/z）。

研究课题结果：

基于RNA-seq数据的共表述在线的功能性掺入数据分析和枢纽底物检验。

基于蛋白质数据的共表述在线的功能性掺入数据分析和枢纽底物检验。

RNA-seq 和基因两组研读揭示了对三种药物的中间体两者之间的强间有关性，具有几乎间有同的效果。GO 掺入显示间有异表述的基因包括参予糖类恒定、酪氨酸和翻译的基因。

司来帕格、马西替坦和复氧可更佳 HAPH。Serpina1、Cryz 和 Cmc1 被检验出来，通过多两组研读挑选，作为参予HAPH的关键基因。这些辨认出为 HAPH 的小底物药物程序缺少了一新见解。

研究课题结论：

Selexipag、macitentan 和复氧显着消退了啮齿类动物 HAPH 模型，而 riociguat 的发挥作用较弱。 间有异表述的基因参予糖类酪氨酸、酪氨酸和翻译。 某些蛋白质受到 HAPH 和放射治疗的影响。 我们常用多两组研读方法挑选了关键基因 Serpina1、Cryz 和 Cmc1。 这些辨认出可能有助于更好地了解间歇性所就其的底物程序，并可能缺少一新放射治疗靶点。

古书说是：

Xu X, Li H, Wei Q, Li X, Shen Y, Guo G, Chen Y, He K, Liu C. Novel Targets in a High-Altitude Pulmonary Hypertension Rat Model Based on RNA-seq and Proteomics. Front Med (Lausanne). 2021 Nov 3;8:742436. doi: 10.3389/fmed.2021.742436. PMID: 34805208; PMCID: PMC8595261.